intactgenomics：PEmax Enzyme

描述

PE pegRNA Synthesis Kit也可以供應(yīng)

聚集的規(guī)則間隔短回文重復(fù)序列（CRISPR）/CRISPR關(guān)聯(lián)（Cas）系統(tǒng)通過(guò)CRISPR RNA（crRNA）引導(dǎo)沉默入侵核酸，為細(xì)菌和古菌提供對(duì)病毒和質(zhì)粒的適應(yīng)性免疫^1。CRISPR系統(tǒng)由一個(gè)短的非編碼引導(dǎo)RNA（sgRNA）組成，該RNA由一個(gè)靶互補(bǔ)CRISPR RNA（crRNA）和一個(gè)輔助轉(zhuǎn)激活crRNA（tracrRNA^）2組成。Prime編輯作為一種精準(zhǔn)基因編輯技術(shù)越來(lái)越受歡迎。主編輯酶是Cas9尼卡酶突變體（H840A）與改良小鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶（MMLV-RT）的融合。其中一種優(yōu)化的引級(jí)編輯融合稱(chēng)為PEmax酶^3-4。這種引發(fā)編輯酶使得精確的基因編輯成為可能，無(wú)需雙鏈DNA斷裂（DSBs）或供體DNA模板。PEmax需要一種獨(dú)特的長(zhǎng)gRNA，稱(chēng)為“pegRNA"，如圖1所示的示意圖。

完整基因組學(xué)（IG）^® PEmax酶是純化的重組化磷酸鏈球菌Cas9尼卡酶突變體（H840A）-小鼠莫洛尼白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶（MMLV-RT）融合蛋白^3-4，含有C端核定位信號(hào)（NLS），用于靶向細(xì)胞核。該酶設(shè)計(jì)用于執(zhí)行CRISPR引發(fā)編輯^3-4。該酶的物理純度為≥85%，由SDS-PAGE通過(guò)Coomassie®藍(lán)染色評(píng)估。

產(chǎn)品來(lái)源
：大腸桿菌BL21（DE3）菌株表達(dá)化膿性鏈球菌的重組PEmax基因，并配有定制的蛋白質(zhì)純化標(biāo)簽。

組件與存儲(chǔ)
PEmax酶套裝包含以下物品。所有成分存放在-20°C。

• PEmax酶

• 5個(gè)PEmax貼角緩沖器：20 mM HEPES，100 mM NaCl，5 mM MgCl_2,0.1 mM EDTA，pH 6.5 @ 25 °C

質(zhì)量控制檢測(cè)
PEmax酶不含可檢測(cè)RNase、內(nèi)切酶（撕裂）及非特異性DNase活性。

功能測(cè)試
我們已證明，PEmax在體外轉(zhuǎn)錄合成的pegRNA引導(dǎo)分子存在下具有特異性切口活性（見(jiàn)圖2），體外RT活性（未顯示）。

酶稀釋/儲(chǔ)存緩沖液（可選）：50 mM 三鹽酸鈉，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% 甘油，pH 7.5 @ 25 oC

上海牧榮生物科技有限公司

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