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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction,PCR）是分子生物學(xué)中基礎(chǔ)且廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一，用于特異性擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段。盡管PCR儀和試劑是核心要素，但實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行同樣高度依賴一系列專用耗材。這些pcr耗材不僅影響反應(yīng)效率和特異性，還直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性...
什么是輔助脂質(zhì)？輔助脂質(zhì)是一類脂質(zhì)分子，可提高脂質(zhì)納米顆粒(LNP)的顆粒穩(wěn)定性和流動(dòng)性。幾類分子被用作輔助脂質(zhì)，例如以DSPC為例的磷脂（圖1）、膽固醇、聚乙二醇化脂質(zhì)。輔助脂質(zhì)的好處？在脂質(zhì)納米顆粒(LNP)遞送載體中使用輔助脂質(zhì)的主要好處是改善納米顆粒的特性，例如顆粒穩(wěn)定性、遞送功效、耐受性和生物分布。例如，膽固醇可以通過調(diào)節(jié)膜完整性和剛性來增強(qiáng)顆粒穩(wěn)定性。膽固醇衍生物的分子幾何形狀可以進(jìn)一步影響脂質(zhì)納米顆粒的遞送效率和生物分布。膽固醇類似物與C-24烷基植物甾醇可提高...
修飾的DNA亞磷酰胺和RNA亞磷酰胺在研究中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，因?yàn)樗鼈冊(cè)试S將特定的化學(xué)修飾引入核酸中，從而能夠研究結(jié)構(gòu)功能關(guān)系、基因表達(dá)調(diào)控以及基因編輯和RNA干擾(RNAi)等治療應(yīng)用。最近，科學(xué)家（見下文參考文獻(xiàn)）研究了RNA干擾作為靶向基因沉默工具的潛力及其在基因技術(shù)和治療開發(fā)中的應(yīng)用。RNAi是一種自然防御機(jī)制，利用短干擾RNA(siRNA)來沉默特定基因。這些siRNA形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)，可降解目標(biāo)mRNA序列，從而導(dǎo)致基因沉默，但不會(huì)引起非...
亞磷酰胺，也稱為amidite，是一種用于合成寡核苷酸的化合物，寡核苷酸是短鏈核苷酸。它們由連接到亞磷酰胺基團(tuán)的核苷堿基（腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶或尿嘧啶）組成，亞磷酰胺基團(tuán)能夠在合成過程中與不斷增長(zhǎng)的核苷酸鏈形成共價(jià)鍵合。寡核苷酸合成中的亞磷酰胺亞磷酰胺主要用于構(gòu)建寡核苷酸序列的過程，該過程分為多個(gè)步驟，通常為三步或四步。每個(gè)步驟都涉及特定的反應(yīng)和純化步驟，以將單個(gè)核苷酸添加到不斷增長(zhǎng)的寡核苷酸鏈中并組裝所需的更長(zhǎng)序列。在合成過程中，亞酰胺被激活并附著在固體載體上，...
可電離脂質(zhì)是一類脂質(zhì)分子，在生理pH值下保持中性，但在低pH值下質(zhì)子化，使它們帶正電荷，ALC-0315（圖1）是一個(gè)例子，其胺位點(diǎn)可在低pH值下質(zhì)子化。圖1：ALC-0315的結(jié)構(gòu)可電離脂質(zhì)是可電離脂質(zhì)納米顆粒(LNP)的關(guān)鍵成分之一，已廣泛用于RNA治療藥物的全身遞送。LNPs中的其他脂質(zhì)分子包括輔助脂質(zhì)、膽固醇、PEG脂質(zhì)等。LNP制劑中常見的可電離脂質(zhì)材料包括C12-200、cKK-E12和DLin-MC3-DMA。這些LNP在0.002mgsiRNA/kg的劑量水平...
陽離子脂質(zhì)（lipoplexes）和聚合物（polyplexes）是常用的非病毒基因遞送系統(tǒng)。Tee技術(shù)（觸發(fā)內(nèi)體逃逸）結(jié)合并利用了兩個(gè)實(shí)體的特性，以實(shí)現(xiàn)極其有效的核酸遞送到細(xì)胞中。事實(shí)上，新一代脂多胺含有親脂部分（例如脂質(zhì)）和帶電多胺部分（例如陽離子聚合物）。這些部分協(xié)同作用，確保緊密的核酸壓縮和保護(hù)以及內(nèi)體膜非常有效的去穩(wěn)定，從而允許在胞質(zhì)溶膠中釋放大量核酸并攝取DNA核。特別關(guān)注可生物降解實(shí)體的合成。這樣，轉(zhuǎn)染試劑不會(huì)干擾細(xì)胞機(jī)制，每次實(shí)驗(yàn)都能保持高細(xì)胞活力，并避免任何...
Magnetofection™是一種簡(jiǎn)單且高效的方法轉(zhuǎn)染方法可轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞和難轉(zhuǎn)染細(xì)胞。Magnetofection™的原理是將核酸、轉(zhuǎn)染試劑或病毒與特定的磁性納米粒子結(jié)合起來。然后將所得的分子復(fù)合物濃縮并運(yùn)輸?shù)接蛇m當(dāng)磁場(chǎng)支持的細(xì)胞中。通過這種方式，利用施加在基因載體上的磁力可以將所施加的全部載體劑量非?？焖俚丶性诩?xì)胞上，從而使100%的細(xì)胞與有效的載體劑量接觸，并促進(jìn)細(xì)胞攝取。它是如何工作的？磁性納米顆粒由氧化鐵制成，可生物降解，并根據(jù)應(yīng)用涂有特定...
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